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快速分析作為重要技術課題一直以來都在使用,但伴隨LCMS的迅速普及,提高性價比成為迫在眉睫的問題,成為了加緊快速化的重要因素。
快速分析即縮短分析時間,通常通過縮短色譜柱或提高流動相的流量來達到目的。但是,使用常用的粒徑5μm的填充柱,使用任何方法分離性能都會明顯下降,從而使快速化失去意義。
因此,以(yi)下兩(liang)種方法得以(yi)發展:
Prominence 使用迅速轉移
Prominence使用標準部件,可以同時滿足研究人員傳統分析和高速分析的需求,也可以支持高達85℃的操作溫度,從而使更低壓力下的快速分析成為可能,同時該儀器體現出的分析性能和通量水平即使是在更昂貴的儀器配置上也不多見。
Prominence UFLC通過以下特性支持快速分析:
Chromatographic conditions; column: described above, mobile phase: water/acetonitrile (3/7,v/v), flow rate: described above, temperature: 40℃, detection: absorbance at 245 nm, sample volume: 4μL(XR-ODS), 10μL(VP-ODS).
Peaks; 1: actophenone, 2: propiophenone, 3: butyrophenone, 4: balenophenone, 5: hexanophenone, 6: heptanophenone, 7: octanophenone.
Chromatographic conditions; column: Shim-pack XR-ODS(3mm i.d.×30mm, 2.2μm), mobile phase: water/acetonitrile(4/6 to 2/8 in 0.4 min, convex gradient), flow rate: 3mL/min, temperature: 80℃, detection: absorbance at 245 nm, sample volume: 4μL(each 800 nm ol),.0.1 min delayed injection.
Peaks; 1: actophenone, 2: propiophenone, 3: butyrophenone, 4: balenophenone, 5: hexanophenone, 6: heptanophenone, 7: octanophenone.
Chromatographic conditions;
mobile phase: water/acetonitrile (3/7, v/v),
detection: absorbance at 245 nm.
Peaks: 1: 苯乙酮(tong) 2: 苯丙酮(tong) 3: 苯丁酮(tong) 4: 苯戊酮(tong) 5: 苯己酮(tong) 6: 苯庚酮(tong) 7: 苯辛酮(tong)
快速分析的重現性
在快速分離中要取得成分保留時間的重現性要比常規分析中更加困難。保留時間的重現性(RSD)和時間的平方根成反比增大,所以需要比常規分析更為嚴格的送液性能。Prominence UFLC可以保證送液分辨率 3nL/min的微沖程送液、梯度送液時控制響應為0.1秒的卓越送液能力,可以發揮極為優越的保留時間重現性。
什么是高通量
快速液相(xiang)色譜的(de)目標(biao)就(jiu)是(shi)高通(tong)量,也就(jiu)是(shi)說每天或每小時(shi)(shi)有更多的(de)樣品被分析。為了實(shi)現(xian)高通(tong)量,不(bu)僅要(yao)縮短單個樣品分析時(shi)(shi)間,而(er)且整(zheng)個循(xun)環進樣和分析時(shi)(shi)間也必須優化(hua)。追求快速化(hua)的(de)本意不(bu)僅是(shi)縮短分析時(shi)(shi)間,而(er)且是(shi)縮短分析周期。Prominence UFLC的(de)樣品注入(ru)速度(du)為10秒,使得分析周期得以大為縮短。
應用實例
PTC衍生氨基酸的UFLC分析
氨基酸分析有兩種檢測方法,其一是使用離子交換色譜柱分離之后,進行衍生化再檢測的柱后衍生化法,另一種是先衍生化后,使用反相色譜柱進行分離的柱前衍生法。從快速分析的角度考慮,柱前衍生化法行之有效。在此,使用Shim-pack XR-0DS以更短的時間進行了氨基酸分析。
使(shi)用異(yi)硫(liu)氰(qing)酸苯酯(zhi)進行衍(yan)(yan)生(sheng)(sheng)化。柱(zhu)后衍(yan)(yan)生(sheng)(sheng)法(fa)時(shi)(shi)需(xu)要1小(xiao)時(shi)(shi),柱(zhu)前衍(yan)(yan)生(sheng)(sheng)化法(fa)使(shi)用常規色(se)譜柱(zhu)時(shi)(shi)需(xu)要25分鐘的分析可縮短至4分鐘。
色素的UFLC分析
添加在(zai)食品中的色(se)(se)素(su)(su)有(you)合成化(hua)合物和(he)天然化(hua)合物,這些色(se)(se)素(su)(su)水溶性高,多用(yong)HPLC進(jin)行分(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)。但在(zai)多個色(se)(se)素(su)(su)組合使時(shi),同時(shi)分(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)所(suo)需時(shi)間(jian)(jian)長。在(zai)此(ci)表示使用(yong)Shim-pack XR-ODS超(chao)快(kuai)速LC進(jin)行的色(se)(se)素(su)(su)同時(shi)分(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)例。12種成分(fen)(fen)(fen)色(se)(se)素(su)(su)的同時(shi)分(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)的結果(guo)如下(xia)張色(se)(se)譜圖。使用(yong)常(chang)規(gui)LC所(suo)需分(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)時(shi)間(jian)(jian)為50分(fen)(fen)(fen)鐘,而使用(yong)超(chao)快(kuai)速LC,約6分(fen)(fen)(fen)鐘便結了分(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)。
多環芳烴(PAHs)的UFLC分析
PAHs是一種判斷車輛等廢氣污染大氣環境程度的化學物質。PAHs具有強致癌性,所以這些物質的大氣監測是重要的測定項目。PAHs顯示強熒光,可以利用熒光檢測器進行高靈敏分析。
對于(yu)此10種PAHs的分析,在(zai)不(bu)損失分離狀態下,相對于(yu)常規LC (分析時(shi)間(jian)50分鐘) ,UFLC實現了10倍速度(du)的快速化分析(分析時(shi)間(jian)5分鐘)。